血清培养不好怎么办呢

血清提不出来怎么办

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

SP2/0养久了细胞状态变差了，怎么办？用什么样的血清比较好？

细胞培养时间久了，状态出现变化其实是比较常见的现象，细胞培养过程中需要控制的变量太多，任何环节出现问题都可能会导致细胞状态变差或者培养失败。一般建议在细胞传代3~5代，状态良好时进行适当冻存，后续培养出现异常情况也可以用冻存的细胞进行补救。

选择血清的标准，就是能把手头在养的细胞养好就行，所以选择的方法就是在准备更换血清批次前先用试用装，确定该批次的血清培养自己的细胞是没有问题的，然后再进行购买。

注意要在当前批次血清用完之前就准备下个批次血清的筛选，避免出现选取筛选效果不好又没有合适血清使用的情况。

细胞复苏不好怎么办 血清浓度

细胞冻存时候需要细胞状态在对数生长期，冻存液的配比是 DMSO：血清：培养基=1：2：7， 但一般偷懒的方法就是直接用带血清的培养基与DMSO成9：1的配方配制。冻存时需要程序降温，如果有条件使用程序降温盒比较好，可以达到1度每分钟。

有的细胞不适合冻存使用，一冻存就失去性质或者活性，比如原代细胞等，必须在一定时间内做完该做的试验。

复苏细胞的时候需要快速稀释，这样对细胞损伤最小。

细胞培养老是污染，怎么解决的呀！！！

细胞培养最关键的还是操作，如果操作规范的话，污染几率是很小的，如果在培养的时候总是有黑色点状物质，可以考虑是不是细胞碎片或者血清里的蛋白质沉淀。细胞污染可能原因：1.天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。

2.培养间里可能暗藏污染原。

3.注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我以前遇到过）4.培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。5.血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，我们觉得联系不大。

解决办法：1.彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。2.彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。

（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。

3.实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。4.一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。5.如果用双抗，应该现用现配。

6.注意过滤器的消毒灭菌。7.经验告诉我们过期1年内的血清，只要保存妥当，其实血清的效价是不会降低的；还有刚购买的大规格的血清收到后，避免反复冻融，血清分装的时候要无菌分装，转入无菌间，在超净台内将血清分装入50-100ml血清瓶中封口，并于-20℃保存备用。分装时注意：① 预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；② 用吸液管吹出血清时要注意：③ 不要吹出气泡，血清很粘稠，很容易产生气泡。如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下。

8.检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。

血清长期不用，在细胞培养过程效果会下降吗

血清长期不用，在细胞培养过程效果会下降细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。

有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。

影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。

最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。

F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。准备几种培养基，然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验，来选择其中最适合的。

以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。

细胞培养出现问题了怎么办

细胞培养过程中会出现一些问题，比如：细胞无法在培养皿上贴壁生长，细胞生长缓慢，细胞死亡等。那么该如何解决呢？一、细胞无法在培养器皿上贴壁生长1.细胞胰酶消化过度：缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。

2.支原体污染：隔离细胞，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。

3.培养基中无附着因子：如果使用的是无血清配方，应确保含有附着因子或者使用经过包被的培养板。二、细胞生长缓慢1.培养基或血清改变：比较不同培养基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有无差异；通过生长实验比较新老批次血清有无差异；增大细胞初始接种密度；使细胞逐步适应新的培养基。2.必需生长促进成分（如L-谷氨酰胺或生长因子）耗竭、缺乏或分解：去除原培养基，加入新鲜培养基；向培养基中添加生长促进成分（如L-谷氨酰胺）。3.轻度细菌或真菌污染：在不添加抗生素的条件下进行培养，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。

4.时间存储不当：血清应于-5℃至-20℃下储存；培养基应于2℃~8℃下避光储存；尽量减少血清和培养基见光时间。5.细胞初始接种密度低：增大活细胞接种密度。6.细胞衰老、老化：将老化细胞丢弃，取用代数较少的细胞。

7.支原体污染：隔离细胞，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。三、培养基pH值变化迅速1.培养箱CO2分压设置错误：根据培养基中NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时，应相应地使用5%-10%的CO2分压。2.细胞培养瓶瓶盖过紧：将瓶盖旋松1/4圈。

3.碳酸氢盐缓存系统缓冲能力不足：加入HEPES缓冲液，使其终浓度为10-25mM。4.培养基中盐含量不正确：CO2平衡环境中使用以Earle平衡盐为基础的培养基，大气条件下使用以Hanks平衡盐为基础的培养基。5.细菌、酵母或真菌污染：将细胞和培养基灭菌处理后丢弃。

四、细胞凋亡1.培养箱中无CO2：监测培养箱中CO2使用速度以便确定及时更换气瓶；经常检测管路连接处是否漏气；不要频繁开启培养箱门。2.培养箱内温度有波动：监测培养箱内温度，及时校正。3.使用抗生素达到毒性浓度：减少抗生素的用量；使用无血清培养基时，抗生素浓度应降低至1/10。4.细胞复苏或冻存时受到损伤：取用新的细胞。

5.培养基的渗透压不合适：检查完全培养基的渗透压。大多数哺乳动物细胞可耐受260~350mOsm/kg的渗透压，加入某些试剂和药物后会影响培养基的渗透压；昆虫细胞培养基的渗透压（340~380mOsm/kg）要高于哺乳动物细胞。6.培养基中毒性代谢产物蓄积：去除原培养基，换用新鲜培养基。五、悬浮细胞集成团1.存在钙离子和镁离子：用不含钙离子和镁离子的平衡盐溶液清洗细胞，轻轻吹打细胞，使其形成单细胞悬液。

2.支原体污染：隔离细胞，检测是否感染支原体；清洗通风厨和培养箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢弃。3.蛋白水解酶消化过度导致细胞裂解、DNA释放：用0.001%DNA酶I处理细胞；用PBS冲洗后再接种到新培养基中。